吸光光度法测量照射的光被样品吸收了多少。因为照射的光,除了被样品吸收的部分,其他都会经过样品,因此通过测量经过样品的光即可以估算样品的吸光度。在观察光的波长和照射光的波长相同的情况下,会观察到照射光减少。
但是在荧光分光光度法中,激发光的能量被吸收,然后转化为不同形式的光,即荧光,荧光的波长总会比激发光的波长长。一些能量在转换过程中发生损失,还有一些能量被吸收,不是所有的激发光都能转换为荧光。因此观察到的光和照射的光会具有不同的波长。
在荧光光度法中,我们需要检测的是荧光而不是激发光,因此,不希望激发光进入检测系统。
同时,由于荧光和激发光的波长的不同,荧光分光光度法中有两种扫描模式(Scan mode),一种是Excitation,一种是Emission;
得到的光谱为:荧光激发光谱和荧光发射光谱
荧光激发光谱Excitation:
让不同波长的激发光激发荧光物质使之发生荧光,而让荧光以固定的发射波长照射到检测器上,然后以激发光波长为横坐标,以荧光强度为纵坐标所绘制的图,即为荧光激发光谱。荧光发射光谱的形状与激发光的波长无关。
激发光谱:固定发射光的波长,改变激发光的波长,记录荧光强度随激发波长的变化。
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荧光发射光谱Emission:
使激发光的波长和强度保持不变,而让荧光物质所发出的荧光通过发射单色器照射于检测器上,亦即进行扫描,以荧光波长为横坐标,以荧光强度为纵坐标作图,即为荧光发射光谱,又称荧光光谱。
发射光谱:固定激发光的波长,记录不同发射波长处荧光强度随发射波长的变化。
样品被刺激的状态——激发态Excited state
用来刺激样品的光——激发光Excitation light
样品受刺激后的发射——荧光Fluorescence
https://www.hitachi-hightech.com/global/products/science/tech/ana/uv/fl_basic/fluorescence.html#sec010
https://www.zhihu.com/question/29385156/answer/915521617